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固相萃取小柱的选择
发布时间:2017-08-22   点击次数:1700次

1.固相萃取柱的选择

  1. 柱填料的选择

根据目标化合物与干扰物的差异,如极性,分子量,pka值等,选择合适的填料。

2 固相萃取柱规格的选择

对于反相、正相和吸附型固相萃取柱来说,被萃取样品的质量不超SPE柱填料的5%

离子交换型的固相萃取柱,必须考虑离子交换的容量。SAXSCX其吸附容量为0.2mg/g下表附SPE小柱的容量和洗脱参数

 

SPE柱上样容量和洗脱体积的选择

 

规格

zui大上样量

zui小洗脱体积

100mg/1mL

5mg

250µL

200mg/3mL

10mg

500µL

500mg/6mL

25mg

1。2mL

1g/6mL

50mg

2.4mL

 

3.选择合适的固相萃取方法

固相萃取的保留机制可分为两种:

3-1 吸附剂(填料)保留目标化合物:绝大多数化合物应用此机制,填料保留其目标组分及少量杂质,通过淋洗步骤去除吸附在柱上的少量杂质,zui后选择合适的(洗脱)溶剂把目标组分洗脱下来。

 

根据吸附剂的保留机理可进一步分为:

1)反相C18,C8,CN,Phenyl,C4,C1

  1. 分析物:非极性至中等极性
  2. 基质:水溶性
  3. 方法:

a。活化:通常用水溶性有机溶剂如甲醇活化,然后用水平衡

b.淋洗:含0-50%极性溶剂的缓冲溶液淋洗杂质

c.洗脱:极性或非极性溶剂洗脱目标物

2)正相(Silica, Florisil,Diol,NH2

  1. 分析物:中等极性到强极性
  2. 基质:非极性至中等极性
  3. 方法:

a.活化:非极性有机溶剂

b。洗脱:非极性有机溶剂

 反相溶剂洗脱强度:

己烷

异辛烷

四氯甲烷 

氯fang 

二氯甲烷

四氢呋喃

乙mi

乙酸乙酯

丙酮

乙腈

异丙醇 

甲醇

3)阳离子交换(SCX,PRS,COOH

  1. 分析物:阳离子(碱性)化合物
  2. 方法:
  3. 1.活化:用于非极性有机溶剂中的样品时,可用样品溶剂来活化;在用于极性溶剂中的样品时,可用水溶性有机溶剂过柱后,然后用水平衡,zui后再用适当pH值的缓冲溶液进行平衡。
  • 2.上样:样品溶液pH值要小于pKa两个单位(以保证其带电荷
  • 3.洗脱:洗脱溶液pH值要大于pKa两个单位(中和分析物的电荷)
  •  

4)阴离子交换(SAX,PSA,NH2PAX/MAX

  • 分析物:阴离子(酸性)化合物
  • 方法:
  • 1.活化:用于非极性有机溶剂中的样品时,可用样品溶剂来活化;在用于极性溶剂中的样品时,可用水溶性有机溶剂活化后,然后用水平衡,zui后再用适当pH值的缓冲溶液进行平衡。
  • 2.上样:样品溶液pH值要大于pKa两个单位(以保证其带电荷 )。
  • 3.洗脱:洗脱溶液pH值要小于pKa两个单位(中和分析物的电荷)。

 

3-2 吸附剂(填料)保留杂质:食品中色素等杂质的去除多用此机制。填料保留杂质而不保留或只保留极少量的目标组分,所以上样后即开始收集目标组分,zui后用目标物所在的溶剂进一步洗脱。合并两部分收集液。

1).活化:以样品所在的有机溶剂进化活化,1-2柱管体积

2).上样:提取液转移至柱内,并收集流出液

3).洗脱:用样品所在的有机溶剂进一步洗脱,收集流出液。合并上样和洗脱流出液。

附:固相萃取中常见物质和处理方法

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