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Waters ACQUITY UPLCTM BEH HILIC色谱柱
发布时间:2017-11-27   点击次数:708次

操作条件要求:
由于ACQUITY UPLC BEH HILIC色谱柱不含有任何键合相,因此其pH使用范围为1-8,可以在90℃稳定范围内使用
同其它任何色谱柱一样,在极端pH、压力以及高温条件下使用将缩短色谱柱寿命
色谱柱平衡:
用50倍柱体积的50/50乙腈/水平衡,如果流动相中含有缓冲盐则要求流动相中缓冲盐的zui终浓度是10 mmol/L(以水相部分的浓度计算);
在开始进样前,用20倍柱体积的起始流动相平衡后再进样
如果使用梯度条件,在进样前用8-10倍柱体积的流动相平衡
没有充分平衡的色谱柱将可能会出现保留时间的波动
总是保持流动相中缓冲液的浓度为10mM(包括梯度条件下的应用)将得到更好的峰形
流动相要求:
总是经常保持至少5%的极性溶剂在流动相体系中或梯度流动相中(如5%水,5%甲醇或2%水+3%甲醇等),这将保证HILIC色谱填料始终处于水化润湿状态
在流动相体系中至少需要保证含有40%的有机溶剂(如乙腈)
尽量避免使用磷酸盐体系的流动相(磷酸盐缓冲液可能会在HILIC流动相体系中析出)
同甲酸或乙酸流动相相比,甲酸铵或乙酸铵缓冲溶液作流动相可以得到重现性更好的结果。如果方法中一定要用甲酸或乙酸,应该用0.2%(v/v)而不是0.1%(v/v)
进样溶液的要求:
如果可能,进样溶剂应该是100%有机溶剂,要尽可能去除样品溶液中的水或将其含量zui低化。选择洗脱强度弱的HILIC溶剂如乙腈、异丙醇、甲醇等
通用的进样溶液是75/25乙腈/甲醇,使用此条件可以获得较好的样品溶解度和色谱峰形
避免使用水或DMSO作进样溶剂(色谱峰形很差)
如果样品内含有水或DMSO,需要使用反相SPE技术将溶剂体系转换为乙腈。如果确实不能进行此操作,需要用有机溶剂稀释水或DMSO。
其它需要注意的问题:
ACQUITY UPLCTM BEH HILIC色谱柱仅仅是用来分析和保留强极性碱的,酸性、中性或非极性化合物没有保留
对于分子量低于200道尔顿的强极性碱,ACQUITY UPLCTM BEH HILIC色谱柱的zui佳流速范围是0.4~0.8ml/min
同Atlantis HILIC 硅胶基质的色谱柱相比,ACQUITY UPLCTM BEH HILIC色谱柱的保留要弱(梯度条件下保留约低20%,等度条件下保留约低35~65%),这是由于BEH颗粒的表面硅羟基浓度较低的原因
在HILIC的使用中,请注意水是洗脱能力zui强的溶剂,因此样品溶液中必须尽可能避免含水
摸索条件建议使用一个梯度条件(从95%乙腈至50%乙腈的梯度),如果没有保留,则用95:3:2的乙腈:甲醇:水相缓冲液进行等度分析
将流动相中的水换成甲醇、丙酮或异丙醇也能提高保留
请确保进样针清洗的弱清洗溶剂是起始流动相(如高比例有机溶剂),否则峰形将变差

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